在ELISA試驗(yàn)測(cè)定方法中有不少因素影響，其實(shí)際操作流程還是要遵循相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范和要求。除正常反應(yīng)之外，中海在檢查核驗(yàn)中還常常見到出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果問題。

ELISA試驗(yàn)不成功的四個(gè)關(guān)鍵要點(diǎn)：

ELISA實(shí)驗(yàn)失敗關(guān)鍵要點(diǎn)❶標(biāo)本自身的影響:

溶血標(biāo)本和混有紅細(xì)胞的血清經(jīng)ELISA法試驗(yàn)檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性。可能是紅細(xì)胞中的血紅素或溶血血清中包含過氧化物酶的紅蛋清，在清洗過程中通常不容易完全洗干凈。它能使過氧化氫釋放原始氧，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性有色物質(zhì)，即變成藍(lán)色，產(chǎn)生假陽(yáng)性。造成嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。

ELISA試驗(yàn)不成功關(guān)鍵要點(diǎn)❷標(biāo)本被*病毒感染:

因?yàn)?病毒或許包含內(nèi)源性辣根過氧化物酶，被*感染的樣品與溶血樣品一致，或許產(chǎn)生非特異性顯色，勢(shì)必會(huì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)測(cè)定方法*終結(jié)果。

ELISA實(shí)驗(yàn)失敗關(guān)鍵要點(diǎn)❸標(biāo)本儲(chǔ)藏保管不合理:

標(biāo)本在冰箱中放置時(shí)長(zhǎng)太久，會(huì)造成間接ELISA測(cè)定本底過深，產(chǎn)生假陽(yáng)性。為了更好地克服上述影響，ELISA試劑盒測(cè)定方法的血清樣品應(yīng)新鮮采集。如無法馬上測(cè)定方法，可將五日內(nèi)測(cè)定方法的血清樣品儲(chǔ)存在四攝氏度，七天過后測(cè)定方法的血清樣品應(yīng)較低溫度冷藏。冷凍儲(chǔ)藏和解除凍結(jié)的標(biāo)本，造成雞蛋白質(zhì)部分集中化，不均勻分布，應(yīng)充分融合后進(jìn)行測(cè)量。此時(shí)應(yīng)當(dāng)輕輕地融合，無需明顯振蕩。

ELISA試驗(yàn)不成功關(guān)鍵要點(diǎn)❹標(biāo)本凝結(jié)并不充分:

日常工作，偶而為了更好地贏得快速檢測(cè)的時(shí)長(zhǎng)，通常在血液進(jìn)行凝結(jié)前，利用強(qiáng)制離心分離血清，使一部分纖維蛋白原殘留在血清中，中海ELISA測(cè)定方法時(shí)可產(chǎn)生看得見的纖維蛋白塊，易于產(chǎn)生假陽(yáng)性*終結(jié)果。于是采集后應(yīng)當(dāng)使血樣充分凝結(jié)，接著進(jìn)行血清分離。